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Diagnóstico, experimentación, formación y asistencia en campo

Diagnóstico nematológico

Las extracciones se realizan según métodos oficiales reconocidos, descritos en EPPO Bulletin 43.

Micrografía óptica de Xiphinema index
Xiphinema index, hembra adulta. Suelo de viñedo, Apulia, Italia.

Análisis de la nematofauna

El informe no se limita al recuento de los parásitos. Recoge la composición de toda la comunidad nematológica del suelo, desglosada por función trófica — parásitos, depredadores, omnívoros, descomponedores — con el cálculo de la relación parásitos/depredadores.

Gráfico de la composición trófica de la comunidad nematológica del suelo
A la izquierda: composición trófica de la comunidad nematológica del suelo — parásitos, depredadores, omnívoros y descomponedores — expresada como porcentaje del total de individuos extraídos.
Gráfico de la distribución de los nematodos fitoparásitos por género
A la derecha: distribución de los nematodos fitoparásitos por género, expresada como porcentaje de su total.

Este cuadro proporciona un indicador del estado biológico del suelo que el mero recuento de los fitoparásitos no permite obtener. Resulta útil en la planificación de las replantaciones, en la evaluación del efecto de los tratamientos sobre la componente útil del suelo y en el seguimiento de los sistemas de manejo integrado o ecológico.

Ensayos de eficacia sobre nematicidas

Las actividades experimentales realizadas in vitro se llevan a cabo en el laboratorio de Horto Service. Las actividades experimentales en cámara de crecimiento y en invernadero o campo se realizan en estrecha colaboración con el Centro de Ensayos AgroService de Andria.

Cómo se plantea un ensayo

El planteamiento del estudio se define en función de la eficacia esperada del formulado en estudio. De ella dependen la elección del producto de referencia, el diseño experimental, el cultivo, la duración del ensayo expresada en número de generaciones del parásito y la ubicación de las evaluaciones nematológicas intermedias.

Parcelas experimentales para ensayos de eficacia sobre nematicidas
A la izquierda: parcelas experimentales para la evaluación de la eficacia de nematicidas contra Meloidogyne spp. en tabaco (Nicotiana tabacum) al aire libre. A la derecha: ensayo en banqueta con inóculo artificial a densidad conocida de Meloidogyne spp. en tomate (Solanum lycopersicum). El empleo de sustrato esterilizado y de inóculo calibrado permite comparar un elevado número de tratamientos en condiciones controladas.

Un formulado de eficacia elevada requiere condiciones exigentes, alta presión del parásito, referencia fumigante y evaluación durante dos a cuatro generaciones, en cultivos de ciclo largo. Un formulado de eficacia moderada se evalúa durante una o dos generaciones, con referencia líquida de contacto y presión contenida, en cultivos de ciclo corto.

Importancia de una evaluación intermedia

El elevado potencial biótico de los nematodos formadores de agallas conduce a una rápida proliferación del parásito. En dos o tres generaciones las oleadas de infección saturan los puntos de alimentación y la infestación tiende a nivelarse en los valores más altos observables en campo, con independencia de las diferencias iniciales entre tratamientos.

La consecuencia es que la eficacia inicial del control queda progresivamente enmascarada. Una evaluación realizada demasiado tarde tras el trasplante corre por tanto el riesgo de no discriminar entre tratamientos realmente distintos: por ello una evaluación intermedia, en particular sobre raíces, puede resultar más explicativa que la final y permite establecer durante cuánto tiempo el cultivo permaneció efectivamente protegido.

Selección y manejo de las parcelas de ensayo

Aplicación de los formulados

Para los ensayos en quimigación se emplea una instalación de riego parcelaria específica, con la misma disposición y separación que la de la explotación, tendida sobre terreno preparado y nivelado. Cada parcela dispone de su propio cabezal, que se deja in situ para las aplicaciones sucesivas.

Se utilizan goteros autocompensantes de bajo caudal, para favorecer la humectación horizontal del suelo. Los volúmenes de agua destinados a cada parcela se predosifican y la aplicación es fraccionada y lenta, de modo que se evite la escorrentía superficial y el drenaje profundo. El estado hídrico del suelo se comprueba antes de la aplicación, con humectación previa el día anterior cuando es necesario.

Experimentación in vitro y en ambiente controlado

La actividad de una sustancia puede verificarse a escalas progresivamente más próximas a las condiciones reales, antes de destinar recursos a un ensayo de campo. Horto Service realiza la secuencia completa.

Ensayos preliminares in vitro

Determinación de las dosis letales DL50 y DL90 sobre estadios juveniles infectivos. Las masas de huevos se toman de raíces infectadas y se incuban en agua destilada en cámara de crecimiento a 25 °C. Los juveniles J2 emergidos se recogen y se reparten en alícuotas calibradas, sobre las que se aplican los tratamientos a las concentraciones en estudio. Estudios de este tipo sirven para determinar el potencial nematicida y nematostático de una sustancia, así como la persistencia de su eficacia al término de la exposición. Se realizan también ensayos de eclosión directamente sobre las masas de huevos.

Ensayos preliminares en maceta con inóculo artificial

Ensayos sobre arena inerte o suelo arenoso esterilizado al vapor, que no imponen límites al número de tratamientos comparables. El inóculo se obtiene por extracción masiva de huevos a partir de raíces infectadas, se reparte en alícuotas calibradas y se aplica en suspensión a densidad conocida.

Los tratamientos se aplican en drench a caudal limitado, con humectación previa y reproducción de las fases de quimigación. Las evaluaciones abarcan parámetros biométricos, índice de agallas y tasa de reproducción del parásito al término de la primera y de la segunda generación.

Producción de inóculo

El laboratorio produce inóculo de Meloidogyne spp. mediante extracción masiva de huevos a partir de raíces infectadas. La disponibilidad de inóculo calibrado es la condición para que los ensayos sean reproducibles, y permite además uniformar la infestación en las parcelas de ensayo de campo donde la distribución natural resulte desigual.

Producción de inóculo de Meloidogyne spp. en laboratorio
A la izquierda: extracción masiva de hembras adultas de Meloidogyne spp. a partir de sistemas radicales infectados. En el centro: suspensión de huevos, juveniles de segundo estadio (J2) y machos adultos de Meloidogyne spp. obtenidos de las masas de huevos. A la derecha: tubo con sedimento de huevos destinados a la inoculación de unidades experimentales.

Formación

Horto Service diseña e imparte cursos de formación técnica en nematología agrícola dirigidos a técnicos experimentadores.

Los contenidos comprenden la biología de los nematodos fitoparásitos, las dinámicas de población y la interacción con el ambiente, los criterios de muestreo del suelo y de las matrices vegetales, los principios de la protección integrada y el planteamiento de los ensayos experimentales conforme a la Buena Práctica Experimental.

Asistencia técnica

Horto Service opera también en el ámbito internacional, con actividades de asistencia técnica, formación de técnicos locales y diagnóstico de campo.

Para los análisis no nematológicos — microbiológicos, químicos o físicos — el laboratorio recurre a instalaciones externas.

Composición de micrografías de nematodos fitoparásitos